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ELISA試劑盒的選擇決定了其性質(zhì)

    ELISA試劑盒得選擇決定了其抗原的生物學(xué)的特性以及理化特性的,像是激素、酶、毒素等生物學(xué)活性抗原,通常是不能選用靜脈打針的。

    不一樣個(gè)別對共同抗原的反應性不一樣,而且不一樣抗原發(fā)作免疫反應的能力也有強有弱,因此常常在打針抗原的一起,參與能增強抗原的抗原性物質(zhì),以影響機體發(fā)作較強的免疫反應,這種物質(zhì)稱(chēng)為免疫佐劑。

    免疫前取等容積完全或不完全佐劑與免疫原溶液混合,用振蕩器混勻成乳狀,也可以在免疫前取需求量佐劑置乳缽中研磨,均勻后再邊磨邊滴參與等容積抗原液(其中加卡介苗3~4mg/ml或不加),加完后再繼承研磨成乳劑,滴于冰水上5~10min內完全不分散停止。

    交叉反應率低,標明抗血清的特異性好,反之則特異性差。

    收集的血液置于室溫下1h支配,凝聚后,置4℃下,過(guò)夜(切勿冰凍)分出血清,離心,4000rpm,10min。

    取兔血有兩種方法,一是耳緣靜脈或耳動(dòng)脈放血,二是頸動(dòng)脈入血,也可心臟采血。加強免疫時(shí)用不完全佐劑,初度免疫時(shí)皮下打針百日咳疫苗0.5ml,加強免疫時(shí)不必打針百日咳疫苗。

    在無(wú)菌條件,吸出血清,分裝(0.05~0.2ml),貯于-40℃以下冰箱,或凍干后儲存。

    取動(dòng)脈或靜脈放血時(shí),將兔放入一個(gè)特造的木匣或籠內,耳露于箱(籠)外,也可由另一人捉住兔身。

    避免丟掉抗原,亦可用一打針器裝抗原液,另一打針器裝佐劑,二者以聚乙烯塑料管聯(lián)接,然后二者往復重復抽吸,約數十分鐘后即能完全乳化。

    每2~3周加強免疫一次。

    制作方法:按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內,用超聲波使之混勻,高壓滅菌,置4℃下保留備用。

    ELISA試劑盒特異性是以交叉反應率來(lái)標明的。

    交叉反應率通常是用比賽抑制曲線(xiàn)來(lái)判定的。

    若用兔,用純種新西蘭兔,一組三只,兔的體重以2~3kg為宜。

    家兔是zui常用以發(fā)作抗體的動(dòng)物,因此這兒首要談?wù)撏醚氖占?BR>
    頸動(dòng)脈放血時(shí),將兔仰臥,固定于兔臺,剪去頸部的毛,切開(kāi)皮膚,顯露頸動(dòng)脈,插管,放血。

    不一樣濃度的抗原和近似抗原物質(zhì)分別做比賽抑制曲線(xiàn),計算各自的聯(lián)絡(luò )率(B/T或B/B0),求出各清閑IC50時(shí)的濃度,按下列公式計算交叉反應率。二禮拜后,可在另一耳放血。

    此法可重復屢次放血。

    作免疫用的動(dòng)物有哺乳類(lèi)和禽類(lèi),首要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等,實(shí)驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。

    在第2次加強免疫后2周,從耳緣靜脈取2~3ml血,制備血清,檢查抗體效價(jià)。羊等較大動(dòng)物以頸靜脈、動(dòng)脈取血,鼠等小動(dòng)物取血可參看有關(guān)材料。

    剪去耳緣的毛,用少數二甲苯涂改耳廓,30s后,耳血管擴大、充血。用手輕拉耳尖,以單面剃須刀或尖的手術(shù)刀片,敏捷切開(kāi)動(dòng)脈或靜脈,血液即流出,每次可收集30~40ml。

    抗原劑量,初度劑量為300~500μg,加強免疫的劑量約為初度劑量為1/4支配。

    C冰箱保留。檢查合格后即以其中一打針器作打針用。

    佐劑除了延伸抗原在體內的存留時(shí)間,添加抗原影響效果外,更首要的是,它能影響網(wǎng)狀內皮系統,使介入免疫反應的免疫活性細胞增多,推進(jìn)T細胞與B細胞的相互效果,然后增強機體對抗原的細胞免疫和抗體的發(fā)作。

    ELISA試劑盒未抵達預期效價(jià),需再進(jìn)行加強免疫,直到滿(mǎn)足時(shí)停止。
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