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微生物的培養都比較難嗎?

    現在隨著(zhù)測序技術(shù)的一再發(fā)展,現在大家對于微生物的多樣性也是認識的越來(lái)越全面了,而且大家發(fā)現不同的環(huán)境中其實(shí)是存在微生物的,有的甚至是不能在培養基中生長(cháng)的,長(cháng)久以來(lái)研究人員也是一直都在找到限制微生物生長(cháng)的因素,希望可以從中培養出來(lái)新的微生物。

    目前比較廣泛應用的方法包括:微生物的原位培養,微流控技術(shù),以及配制不同營(yíng)養成分的培養基以更好地讓微生物們在培養基上生長(cháng)等。但是在實(shí)踐中,研究者發(fā)現總的微生物數量和可培養的微生物之間經(jīng)常存在著(zhù)差異,一般我們把這種現象叫“平板計數異?!?。有研究者估計只有1%的土壤細菌才能被培養,并且我們還需要準備成百上千種不同的培養基,來(lái)應對不同微生物的生長(cháng)需求。

    部分微生物生長(cháng)緩慢,在培養基上不形成克隆,它們需要一些未知的養分或者生長(cháng)因子。依賴(lài)其它微生物或者宿主細胞共生,產(chǎn)生對自身作用的毒素部分微生物是寡營(yíng)養類(lèi)型,高營(yíng)養會(huì )致死,它們在休眠期需要持續供給生長(cháng)底物,但即使這樣,依靠稀釋涂平板方法獲得微生物類(lèi)群種類(lèi)還是比較低,為什么許多微生物不在瓊脂培養基上生長(cháng)呢?

    培養基制備要求:

    培養基制備的質(zhì)量將直接影響微生物生長(cháng)。因為各種微生物對其營(yíng)養要求不完全相同,培養目的的不同,各種培養基制備要求如下:

    1、根據培養基配方的成分按量稱(chēng)取,然后溶于蒸餾水中,在使用前對應用的試劑藥品應進(jìn)行質(zhì)量檢驗。

    2、PH 測定及調節:PH測定要在培養基冷至室溫時(shí)進(jìn)行,因在熱或冷的情況下,其PH有一定差異,當測定好時(shí),按計算量加入堿或酸混勻后,應再測試一次。培養基 PH值一定要準確,否則會(huì )影響微生物的生長(cháng)或影響結果的觀(guān)察。但需注意因高壓滅菌可影響一些培養基的 PH 降低或升高,故不宜滅菌壓力過(guò)高或次數太多,以免影響培養基的質(zhì)量,指示劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調完P(guān)H后再加入。

    3、培養基需保持澄清,便于觀(guān)察細菌的生長(cháng)情況,培養基加熱煮沸后,可用脫脂棉 花或絨布過(guò)濾,以除去沉淀物,必要時(shí)可用雞蛋白澄清處理,所用瓊脂條要預先洗凈晾干后使用,避免因瓊脂含雜質(zhì)而影響透明度。

    4、盛裝培養基不宜用鐵、銅等容器,使用洗凈的中性硬質(zhì)玻璃容器為好。

    5、培養基的滅菌既要達到完全滅菌目的,又要注意不因加熱而降低其營(yíng)養價(jià)值,一般121℃15min即可,如為含有不耐高熱物質(zhì)的培養基如糖類(lèi)、血清、明膠等,則應采用低溫滅菌或間歇法滅菌,一些不能加熱的試劑如亞碲酸鉀、卵黃、TTC、抗菌素等,待基礎瓊脂高壓滅菌后涼至50℃左右再加入。

    6、每批培養基制備好后,應做無(wú)菌生長(cháng)試驗及所檢菌株生長(cháng)試驗。如果是生化培養 基,使用標準菌株接種培養,觀(guān)察生化反應結果,應呈正常反應,培養基不應貯存過(guò)久,必要時(shí)可置4℃冰箱存放。

    7、目前各種干燥培養基較多,每批需用標準菌株進(jìn)行生長(cháng)試驗或生化反應觀(guān)察,各種培養基用相應菌株生長(cháng)試驗良好后方可應用,新購進(jìn)的或存放過(guò)久的干燥培養基,在配制時(shí)也應測PH,使用時(shí)需根據產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)用量和方法進(jìn)行。

    8、每批制備的培養基所用化學(xué)試劑、滅菌情況及菌株生長(cháng)試驗結果、制作人員等應做好記錄,以備查詢(xún)。
 
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